霍夫曼调制对比已经确立了自己作为观察未染色,低对比度生物标本的标准。其创新的技术实施许可显著简单的处理和更大的灵活 性。在现代倒置显微镜的光路调制器的集成允许使用范围广泛的明场或载物台的物镜,而不是一小部分的特殊物镜。现在,对比度可以修改和优化的单独使用自 由接近调制器。
在光路径中的特殊成分
在光路中的至少两个特殊的部件所必 需的调节对比度的照明。以使斜光的狭缝板放置在聚光镜的前焦平面。其次,调制器被放置在物镜的后焦平面。调制器包含具有不同的光密度三个指定区域:一个透明区,一个具有15%的光的权限和一个用1%的光的权限。光通过调制器是通过定义所谓的调制。
调节对比度
调节对比度是对比度增强的宽视场显微镜可以转换在未染色标本和活 细胞光学梯度或斜坡入不同的光强度的方法。它是在1975年发明了由罗伯特·霍夫曼和采用狭缝板,使斜照明和调制器,用于光强度调制。由于样品的三维外观,在医学和生命科学的调节对比度的主要应用是类似ICSI和显微技术(胞浆内单精 子注射)在IVF克 隆和原核注射转基 因。
除了上述组分含有偏振片的第 二狭缝通常可以在滑动板中找到。在与位于显微镜的聚光镜的顶部,另一个偏振片组合,该偏振片可以用于控制有 效狭缝开口(通过打开90°(暗)的位置),并启用缓 解的效果。需要注意的是检体未允许的双折射塑料或玻璃容器雇佣的偏振器之间的位置。然而,偏振片不是调制对比度的先决条件。
IMC提供了更多的自 由
在综合调制对比度的情况下(IMC)的调制器的物镜以外的焦平面共轭到所述聚光镜(中间光瞳)的光束路径(图4)结合起来。调制器被安装在其上分别插入在支架上一侧的瞳孔间接口滑块。因此,它们是自 由访问,并允许用户根据需要很容易地调节对比度。 除此之外,
调制相差梯度转换成亮度渐变
细胞的许多部件导致通过固有特性的改变透射光的相位。这些性能可能是斜率和特定结构的陡度,获得修改折射率变化率或仅仅改变在给定结构的厚度的结构。由于这些性质(如单元厚度)通常在一定面积逐渐变化(而不是立即改变),光的相位的过这方面的变化也发生逐渐导致相位梯度。相梯度将衍射入射光引起的光的偏转角的变化。
由于所采用的调制相反的偏斜照明,在偏转的角度的变化可能大大受到影响,光将通过调制器在不同的区域相比,非偏转的光。在小区(s)表示,都或多或少均匀的斜率,陡度,厚度等的圈所产生的图像的区域将显示为灰色。同样情况也适用于图象的背景,因为光通过这些同质区域不会经历相移由于在检体相梯度和几乎不被偏转。(奥林巴斯显微镜)
在一个调制对比度系统的非偏转的光通过在用15%的光的权限的调制器的面积,导致灰的颜色为细胞(S)和背景的均质区域。当光通过引起的相移(例如改变细胞膜的斜率)的试样的区域中,光被偏转或者黑暗(1%许可)或调制器的透明(100%许可)的区域。作为试件是倾斜地照亮,该图像将出现从梯度从梯度的另一侧(在光被偏转到区域与(其中光被偏转到区域用1%许可)和亮的一侧较深100%的许可)。
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