其使用方法是在普通光学显微镜上换上相差聚光器和相差物镜，将用水封载的玻片标本放在载物台上，转动相聚光器，使与物镜的开口率或放大倍数相一致，镜检见物像。取下目镜，换上合轴调整望远镜，伸缩望远镜筒，使看清物镜相板上暗环和环状光阑上的亮环；移动彩虹光圈，使暗环和亮环圆心重合；升降聚光器，使两环完全重合，即在亮环内外侧看到暗的边缘。取下望远镜，换上补偿目镜进行镜检。镜检时只能以微动螺旋调焦而不能转动聚光器，否则需重新进行合轴调整。更换物镜时也要重新进行合轴调整，然后才能观察。相差显微术需用水作封载剂并加盖玻片。载玻片和盖玻片厚度分别为1.0-1.2、0.17-0.18毫米，清洁无损。
(一)仪器和其他物品
(二)光源
显微镜不能采用直射阳光。晴天可用近窗的散射光作光源。也可用日光灯作为光源。而专为显微镜照明而制造的聚丝电灯是较好的光源。
在接通电源后，取下目镜，直接向镜筒内观察，并调节聚光镜上的孔径光阑，使其孔径与视野恰好一样大或略小于视野，其目的是使入射光展开的角度与物镜的数值口径(开口率NA)相一致，既可充分发挥该物镜的分辨力，又能把超过该物镜可能接受的多余光挡住，否则能产生干扰．影响清晰度。所以，原则上使用不同的物镜时应相应调节孔径光阑。放回目镜后，通过调节聚光器上的视光阑或调节照明度控制钮，选择至 佳的照明效果。
1．标本放置
2．调焦
转动粗调节螺旋，升高镜台(或下降镜筒)、使低倍物镜的前端接近载片，用左眼在目镜上观察，并转动粗调节螺旋，使镜台下降(或镜筒上升)，可看到物像，然后转动细调节螺旋，使物假清晰。
3．换高倍镜
用低倍镜看到物像后，转动标本移动器上的螺旋，选择合适的视野，并把要观察的部位置于视野的中 央，转动物镜转换器把高倍镜置镜筒下方。显微镜在设计制造时，都是共焦点的，即低倍镜对焦后，转换高倍镜时一般都能对准焦点，能看到物像，只需转动细准焦螺旋便可使物像清晰。通过调节集光镜上的视光阑或照明度控制钮使获得至 佳照明。
由于细 菌个体微小，需要用油镜进行观察。
1．滴加镜油
转动粗调节螺旋，使镜台下降(或使镜筒上升) 在染色标本处滴加1－2 滴液体石蜡或香柏油。
2．转换油镜
转动物镜转换器，把油镜置镜筒下方。
3．调焦
转动粗调节螺旋，使镜台上升(或镜筒下降)，让镜头的前端浸入镜油中。操作时要从侧面仔细观察，只能让镜头浸入镜油中紧贴着标本而避免让镜头撞击载玻片，导致玻片和镜头损。然后在目镜下进行观察，并缓慢;转动细准焦螺旋使镜台下降(或使镜筒上升)即可看到清晰的物像。
转动细准焦螺旋使镜台下降(或使镜筒上升)时，若油镜已离开油滴，必 须重新进行上述调节操作。不得边用左眼在目镜上观察，边转动细准焦螺旋使镜台上升(或镜筒下降)使镜头前端浸入油滴中，这样易使镜头撞击载玻片，标本和镜头。
4．调节孔径光阑和视光阑
把孔径光阑开到至 大，使与油镜的数值口径相配，通过调节视光阑和照明度控制钮选择合适的照明。转动粗调节螺旋，使镜台下降(或使镜筒上升)，取出染色标本玻片，然后先用擦镜纸接去油镜上的香柏油，再用擦镜纸沾少量二甲苯(不能用酒精)擦去沾在油镜上的镜油，至 后用擦镜纸擦净二甲苯及镜油。用液体石蜡作镜油时，可以只用擦镜纸即可擦净，不必用(或仅用少量)二甲苯。把镜头转成“八”字形，套上镜罩后放入显微镜柜中。

显微镜是贵重精 密的光学仪器，正确的使用、维护与保养，不但观察物体清晰还可延长显微镜的使用寿命。

1、防潮：显微镜应放置在通风干燥，灰尘少，不受阳光直接曝晒的